上海地区例呼吸道感染患儿鼻咽分泌物

本文原载于《国际呼吸杂志》年第17期

儿童感染性疾病中，急性呼吸道感染最为常见，引起巨大的疾病负担，目前是导致学龄前儿童死亡的第二大病因[1]。在儿童呼吸道感染中，绝大部分病原为病毒，目前公认的呼吸道常见病毒有腺病毒(Adenovirus，ADV)，呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyncytialvirus，RSV)、鼻病毒(HumanRhinovirus，HRV)、副流感病毒(Parainfluenzaviruses，PIV)、流感病毒(Influenzaviruses，IFV)。近期，一些新型呼吸道病毒不断被发现，如偏肺病毒(humanmetapneumovirus，HMPV)，冠状病毒(SARS，HCoV-HKU1)，博卡病毒(Humanbocavirus，HBoV)等，其引起的呼吸道感染引起了研究者的重视，对于呼吸道感染患儿明确病原，了解疾病谱，有利于医生指导临床用药，避免抗生素滥用。既往研究主要集中在常见呼吸道病毒的研究，本研究通过采用敏感度高的聚合酶链反应(PCR)及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法，对医院收集的因急性呼吸道感染就诊患儿的份鼻咽抽吸物标本同时检测呼吸道常见病毒及新发病毒，更全面的了解上海地区呼吸道病毒的流行情况。

1　对象与方法

1.1　研究对象

年1月至年12月期间，选择上海交通医院、上海医院、医院医院。对因急性呼吸道感染就诊的小于12岁的儿童在知情同意的情况下，收集鼻咽抽吸物(NPAs)共份，医院伦理委员会同意。病种包括急性上呼吸道感染及下呼吸道感染(急性支气管炎，支气管肺炎，肺炎，哮喘性肺炎，毛细支气管炎)。临床诊断依据《诸福棠实用儿科学》第7版。其中年1～12月收集标本例，年1～12月共收集标本例，其中年龄从11d至12岁，中位年龄为12个月，男例，女例；门诊样本例，住院样本例；临床诊断上呼吸道感染73例，下呼吸道感染例。

1.2　方法

1.2.1　标本收集及处理

于就诊当日使用一次性无菌吸痰管从单侧鼻孔插入达咽部以下，负压吸取鼻咽部分泌物2ml，即刻在超净台内加入病毒保护液(含U/ml青霉素、U/ml链霉素、U/ml两性霉素B及0.25%牛血清白蛋白)混匀分装，－80℃冻存备用，后期将将鼻咽分泌物样本溶解，离心吸取上清，使用由德国QIAGEN公司生产病毒DNA和RNA提取试剂盒QIAampMinEluteVirusSpinKit提取标本中的总RNA和DNA，操作按说明书进行。

1.2.2　病毒检测

根据参考文献[2,3,4,5,6,7]采用RT-PCR方法扩增呼吸道RNA病毒RSV、HRV、IFV-A、IFV-B、PIV1～4、HCoV-NL63和HCoV-HKU1及HMPV，PCR方法扩增呼吸道DNA病毒ADV，HBoV。每次PCR反应均设阳性(由中国疾控中心病毒病所提供的相应病毒阳性质粒)及阴性(无菌水)对照，扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，阳性产物进行核苷酸序列测定。引物由英俊生物公司(北京)合成，序列测定所用引物为通用引物，测序反应由北京擎科新业生物技术有限公司完成。所测得的序列与GenBank中相对应的基因序列进行比较分析。

2　结果

2.1　病毒的检出率

在本研究2年持续监测中，共检出病毒感染阳性标本份，总检出率57.4%(/)，检出的呼吸道病毒中，年RSV检出率最高，年ADV检出率最高。综合2年检测结果，ADV最为常见，检出99例，检出率15.3%，其次为RSV检测出83份，检出率为12.9%；HRV检出80份，检出率为12.4%；新发现病毒中HBoV检出率最高，检出66份，检出率10.2%，未检测到冠状病毒NL-63。

2.2　病毒阳性患儿的年龄分布

病毒阳性患儿年龄为11d至12岁，中位年龄为12个月，其中6个月患儿例，检出率58.1%(/)，6～12个月患儿例，检出率66.7%(/)，13～36个月患儿90例，检出率55.9%(90/)，37～60个月患儿29例，检出率48.3%(29/60)，60个月22例，检出率37.9%(22/58)，提示6个月到1岁年龄段病毒的检出率最高，后随年龄增长，病毒的检出率逐渐下降，其中各呼吸道病毒的年龄分布见表1，根据表格可见RSV在6个月检出率最高，随年龄的增长逐渐下降，HKU1，HBoV，IFVA在1～3岁检出率高，其余病毒均以6个月至1岁检出率最高。ADV、HMPV、PIV-1，PIV-3在6个月至1岁年龄组检出率较高，后检出率降低；HRV在6个月至1岁和大于5岁年龄段检出率较高，PIV-3在6个月和3～5岁年龄组检出率较高。IFVB所有患儿均大于1岁，其中在1～3岁最为多见，而HBoV在1～3岁检出率最高。

2.3　病毒感染病例的时间分布

总体看呼吸道病毒的检出贯穿全年，每月都有检出。无明显季节规律，其中各种呼吸道常见病毒的时间分布见图1。由图可见HRV在各个季节均有检出，但高峰出现在冬春季节；IFV(A、B)、RSV、HKU1、HMPV阳性标本分布时间趋势相似，冬春季是流行高峰；而PIV1～4、ADV则为春夏季多发；HBoV全年均有，但高峰出现在5月。

2.4　诊断构成比

呼吸道常见病毒感染的诊断包括了上呼吸道和下呼吸道感染，临床诊断上呼吸道感染48例，下呼吸道感染例。通过分析呼吸道常见病毒与临床诊断的关系(图2)，可见上海地区病毒感染患儿以下呼吸道感染为主，主要的临床诊断包括哮喘性肺炎(24.3%)，支气管肺炎(22.5%)，肺炎(33%)，支气管炎(12.5%)上呼吸道感染占7.4%。在哮喘性肺炎、支气管肺炎中，HRV为最常见的病毒，急性上呼吸道感染(AURI)中HBoV为最常见的病毒，肺炎中ADV最常见，支气管炎中HRV最常见。从各种不同的呼吸道常见病毒看，不同的病毒引起的疾病也不同，HRV、PIV-1、PIV-2、PIV-4、ADV、HBoV主要引起肺炎；RSV、IFVA、IFVB、HMPV、HKU1主要引起支肺炎，PIV-3主要引起哮喘性肺炎。

3　讨论

本研究结果显示在儿童急性呼吸道感染中，病毒感染仍是主要的原因，占57.4%，其中不同的年份流行的主要病原有所不同，在本研究年份中，年度以RSV最常见，检出率20.3%，年度则交替为ADV为主，检出率17.7%，但连续2年的监测提示在上海地区，儿童急性呼吸道感染的主要病原仍集中在RSV，ADV，这与国内温州，北京的研究结论相似[8,9]。并且提示与过去相比，流行的主要病毒并没有发生改变。对于新发现的几种呼吸道病毒，除冠状病毒NL-63外，在上海地区均有检出，其中比较多见的为HBoV，其次为HMPV。既往研究提示婴幼儿更易感染病毒，可能与其细胞免疫功能尚未完善，导致免疫功能偏低关，在本研究中同样发现，无论是经典的呼吸道病毒还是新发现的病毒，均提示6个月到1岁年龄段病毒的检出率最高，后随年龄增长，病毒的检出率逐渐下降，提示我们对于婴幼儿来说，应重点