标准下呼吸道标本培养

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下呼吸道标本培养口咽部的定植菌群

常见口咽部定植菌:需氧菌，兼性厌氧菌，和厌氧菌

菌群总数：CFU/ml-CFU/ml

健康人群咽部定植菌的特点：数量少，以革兰氏阳性细菌为主

注意：人体基础条件的变化会影响定植菌的种类和数量！如：免疫抑制，慢性肺病，广谱抗菌药物治疗或住院患者的人群中，革兰氏阴性杆菌的优势会明显增加。

破坏正常菌群常见因素肺部感染的常见机制

最常见原因：肺泡内吸入了口咽部定植菌

其次：吸入含有微生物的气溶胶，如使用不清洁的呼吸机

再次：血液播散性肺炎，感染通常造成双肺下叶肺炎

下呼吸道感染常见标本类型

非侵入性下呼吸道标本

咳出痰：在医生和护士的指导下，患者取出假牙，清水漱口后（对于分枝杆菌和军团菌的培养需要用无菌水漱口，非无菌水对常见的细菌培养影响很小），用力咳出痰，置于无菌容器送检。

诱导痰：患者取出假牙，刷完牙龈和舌头后（不用牙膏），用无菌水或盐水漱口，借助喷雾器吸入20-30ml的生理盐水喷雾，然后用力咳出痰，置于无菌容器送检。（诱导痰可用于分枝杆菌，以及HIV病人卡氏肺孢子虫的检测。）

气道抽出物：借助吸痰器，机械呼吸患者，可经呼吸机气道插管吸取痰；自主呼吸患者，从气道吸取痰，置于无菌容器送检。不能自主咳痰的小儿，可用此方法取痰，若标本量很少，可将吸痰的导管置于无菌容器送检。

侵入性下呼吸道标本（以下操作在气管镜下完成）

气管镜刷片：通过气管镜管道，将采样的硬毛刷送至患侧，刷取，刷取脓性分泌物，采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜，用无菌剪刀剪断毛刷，置于含1mL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养)，快速送检。

支气管冲洗液：用注射器将无菌生理盐水（成人20-30ml，儿童5ml），通过气管镜管道注入支气管，然后轻轻吸取冲洗液，置于无菌容器送检。

肺泡灌洗液：用注射器将无菌生理盐水（成人25-30ml，儿童5-10ml），通过气管镜管道分多次注入患侧气道，几个呼吸循环后，收集肺泡灌洗液（弃掉前面的部分），置于无菌容器送检。

血培养：当肺部感染患者伴有发热（＞38℃）或低体温（＜36℃）、白细胞增多或粒细胞减少等血培养送检指征时，送检血培养(具体参考《临床微生物实验室血培养操作规范》中标本采集和送检要求)。

革兰染色

用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格

痰和气道抽出物细胞计数

E：10、10-25、25

WBC：10、10-25、25

灌洗液细胞计数E：1%、1%（不合格）

痰标本25鳞状上皮细胞/每低倍视野=不合格，建议重新送检

痰标本，中性粒细胞多（25），且鳞状上皮细胞特别少（＜10）=接受，进行培养

革兰染色评估痰和气道抽出物具体如下

多型核白细胞（W）

鳞状上皮细胞（E）

判断或处理

＞25

＜10

合格标本

＞25

10-25

可接受标本

＞25

＞25

重新送检

10-25

＞25

重新送检

＜10

＞25

重新送检

＜10

＜10

重新送检

标本转运

运送室温≤2h,2-8℃≤24h

拒收标准

通过筛选并拒收的标本如下

1.24h内重复采集的痰细菌培养标本;

2.唾液;鼻冲洗液和分泌物、鼻孔拭子;

3.咽部标本;

4.未经保护套管收集的支气管刷培养标本;

5.痰的厌氧菌培养标本;

注意：a.除支气管穿刺吸出物、PSB采集的分泌物经双层套管保护行床边接种(做厌氧培养)、活检标本、胸水或其他未经污染的标本以外，其他的标本均不适合做厌氧菌培养。

b.诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。

培养

1.接种BA、MAC、CHOC

痰和气道抽出物半定量接种，棉签涂布一区，四区划线

灌洗液定量接种10μl，BA不分区划线，MAC、CHOC四区划线

2.孵育在含有5%CO2的35-37℃温箱，孵育24-48h。

判断有临床意义数量的分离菌

以下情况可判断分离菌的数量具有临床意义:

1.定性培养生长的病原菌数量达到以下情况时，判断为有临床意义:在平板第2区划线仍大量生长，或培养物生长量超过1/4平板;培养中少量生长且革兰染色涂片可见此形态细菌与炎症细胞相关联的病原菌;在平板划线第1区生长且纯度超过90%以上时，同时革兰染色涂片可见此形态细菌与炎症细胞相关的病原菌。

2.定量培养有临床意义的数量:

1)BAL:菌落计数≥CFU/mL;

2)PSB:菌落计数≥CFU/mL。

注:分别计数生长有细菌的最高稀释度平板上的不同形态菌落数量，乘上稀释倍数即为此细菌的菌落数。

下呼吸道感染的主要类型及主要病原体

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