上呼吸道样品收集病毒富集方法

前几天，锐帮读平台对一篇利用宏基因组测序研究呼吸道病毒多样性的文章进行了解读（点击回顾）。应读者留言的提问今天小编为大家详细介绍一下文中呼吸道样品的采集以及病毒富集方法。研究对象严重急性呼吸道感染（SARI）患者。研究对象筛选条件体温≥38℃，同时伴有以下症状之一：咳嗽、咽喉痛、呼吸急促、呼吸音异常、呼吸困难、胸痛等。样品收集1.采样器材：无菌棉拭子、含采样液的无菌外旋塑料管。2.鼻腔取样：尽可能使明亮的光线照进鼻腔，将洁净的鼻咽拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，尾部弃去，拧紧盖子。3.咽喉取样：明亮的光线从检查者肩膀上方照射进张开的口腔，让患者深呼吸，然后发“啊”音，用压舌板轻轻压舌，再用洁净的咽拭子来回擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，然后将拭子头浸入采样液中，尾部弃去，拧紧盖子。标本收集完后，应在4℃条件下、48h内送至实验室质检；如不能在48h内处理标本，应将标本放在-70℃以下环境中保存。病毒富集令呼吸道样品穿过一个0.22μm的滤膜，收集滤液，rpm离心3小时（离心机SW41rotor；Beckman），使研磨珠不断击打病毒颗粒。研磨珠需要提前用核酸酶混合物（DNA酶、RNA酶、核酸酶）进行处理，以去除残留的胞外核酸。离心完后，收集上清液至无菌管内，即刻提取或放于-70℃以下环境中保存。DNA提取采用试剂盒法（QIAampMinEluteVirusSpinKit）提取富集到的病毒DNA。注意事项1.咽喉取样时，拭子不能接触到口腔和舌粘膜。2.取样时间最好在发病72小时内，晨起后。3.鼻腔和咽部样品，可只收集一种，也可同时收集2种并混合。参考文献：MetagenomicanalysisofviralgeneticdiversityinrespiratorysamplesfromchildrenwithsevereacuterespiratoryinfectioninChina







































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